Un cop les cèl·lules cultivem

fàbrica de cèl·lulesestan contaminats, la majoria són difícils de manejar.Si les cèl·lules contaminades són valuoses i difícils d'obtenir de nou, es poden utilitzar els mètodes següents per eliminar-les.

1. Utilitza antibiòtics

Els antibiòtics són més efectius per matar bacterisfàbriques cel·lulars.La medicació combinada és més eficaç que la medicació sola.La medicació preventiva és més efectiva que la medicació després de la contaminació.La medicació preventiva generalment utilitza un antibiòtic doble (penicil·lina 100u/mL més estreptomicina 100μg/mL).Després de la contaminació, el mètode de neteja ha de ser de 5 a 10 vegades més gran que la quantitat habitual.El fàrmac s'ha d'utilitzar durant 24 a 48 hores després de l'addició, i després substituir-lo per la rutina habitual.Fluid de cultiu.Aquest mètode pot ser eficaç en les primeres etapes de la contaminació.A més de la penicil·lina i l'estreptomicina, els antibiòtics utilitzats també poden incloure gentamicina, kanamicina, polimixina, tetraciclina, nistatina, etc. Els més utilitzats són de 400 a 800 μg/mL de kanamicina o 200 μg/mL de tetraciclina.El medi es canvia cada 2 o 3 dies i es transmet durant 1 o 2 generacions per al tractament.En els darrers anys, s'ha informat que 4-fluoro, 2-hidroxiquinolina (Ciprofloxacina, Cip), derivat de pleu-romutilina (derivat de pleu-romutilina, BM-Cyclin2: BM-1 i derivat de tetraciclina (BM-2)) són antibiòtics. eficaç per matar el micoplasma quan s'utilitza sol o en combinació.Tots aquests tres antibiòtics es preparen en solucions concentrades 250X en PBS i s'emmagatzemen a -20 ° C per al seu ús posterior.La concentració d'ús Cip és de 10 μg/mL, BM-1 és de 10 μg/mL i BM-2 és de 5 μg/mL.Quan utilitzeu, primer aspireu el medi de cultiu contaminat, afegiu el medi de cultiu RPMI1640 que conté BM-1, després aspireu el medi de cultiu al cap de 3 dies, afegiu el medi de cultiu RPMI1640 que conté BM-2 i el cultiu durant 4 dies, i així successivament durant 3 dies consecutius. .rondes, fins que es demostri mitjançant una microscòpia de tinció fluorescent 33258 que s'ha eliminat el micoplasma, s'afegeix el medi de cultiu normal per al cultiu i el pas 3-4 vegades.

2. Tractament tèrmic

Incubar el cultiu de teixits contaminats a 41 °C durant 18 hores pot matar el micoplasma, però té efectes adversos sobre les cèl·lules.Per tant, abans del tractament s'ha de fer una prova preliminar per explorar el temps d'escalfament que pot matar el micoplasma al màxim i tenir el menor impacte sobre les cèl·lules.Aquest mètode de vegades no és fiable.Si es tracta primer amb fàrmacs i després s'escalfa a 41 °C, l'efecte serà millor.

3. Utilitzar sèrum específic de micoplasma

La contaminació per micoplasma es pot eliminar amb sèrum immune de micoplasma de conill al 5% (títol d'hemaglutinació 1:320 o superior).Com que l'anticòs específic pot inhibir el creixement del micoplasma, es torna negatiu 11 dies després del tractament amb antisèrum i roman negatiu 5 mesos després.és negatiu.Tanmateix, aquest mètode és més problemàtic i no és tan convenient i econòmic com l'ús d'antibiòtics.

4. Altres mètodes

A més dels mètodes esmentats anteriorment per eliminar la contaminació, també hi ha mètodes d'inoculació i esterilització en animals, mètodes de fagocitosi de macròfags, mètodes d'addició de bromouracil als contaminats.ampolles de cultiui després irradiar-los amb llum, i mètodes de filtració, etc., però tots són més molestos i ineficaços.Per tant, un cop es produeix la contaminació per micoplasma, tret que tingui un valor especialment important, generalment es descarta i es torna a cultivar.

poseu-vos en contacte amb Whatsapp i Wechat: +86 180 8048 1709